基本步驟如下：

　　1.單菌落挑取

　　把LB培養(yǎng)基倒入排槍槽中，然后用排槍加400μL LB培養(yǎng)基到48孔深孔板，用鑷子拿已滅菌的小白槍頭挑取平板上的單菌落并放到48孔深孔板中，同時在48孔深孔板和相應(yīng)的表單上做好記錄，注意對于藍白斑篩選的板子要挑的是白斑。挑好的48孔深孔板用封口膜蓋好并做好相應(yīng)標記（日期、板號等），用針頭在封口膜打孔，把它放在37搖床上搖一個小時。

　　2.菌落PCR反應(yīng)

　　配置好PCR反應(yīng)的反應(yīng)體系，把配好的反應(yīng)液加到96孔反應(yīng)板中，用排槍加2.5μL的菌液到其中，注意在96孔反應(yīng)板上做好標記。把96孔反應(yīng)板放在PCR儀上蓋好橡膠墊，按照PCR反應(yīng)條件設(shè)置反應(yīng)程序，注意一定要把PCR儀的蓋子蓋緊。

　　3.瓊脂糖凝膠電泳

　　一般先配置1.0%-1.2%瓊脂糖凝膠（即稱1.2g的瓊脂糖加100ml的TAE），在96孔反應(yīng)板每個管中加0.5μL的溴酚藍，震蕩均勻，然后點樣，電泳好的瓊脂糖凝膠拍照，命名保存。

　　4.判斷陽性克隆并測序

　　根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳圖條帶來判斷陽性克隆，把陽性克隆的菌液進行擴大培養(yǎng)，進行測序驗證，看看是否有*正確的序列。